提到HIV检测,很多人会想到HIV抗体检测、HIV RNA检测。随着检测技术的不断发展,HIV-1 DNA检测作为艾滋病极早期检测和精准治疗又一“利器”,正逐渐走进大众视野。
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一、HIV-1 DNA是病毒的“潜伏身份证”
要理解HIV-DNA检测,得先明白HIV在人体内的“作案步骤”。HIV是一种双链RNA逆转录病毒,进入人体后不会直接作乱,而是会玩一套“伪装潜伏术”:第一步,它带着自身的RNA“密码本”侵入免疫细胞;第二步,通过逆转录酶把RNA合成cDNA;第三步,把这段cDNA悄悄的整合到宿主细胞的基因组DNA中,形成前病毒。从此长期“潜伏”,形成难以清除的“病毒储存库”。
二、HIV-1 DNA检测的意义
HIV-1储存库的持续存在是治愈艾滋病的主要障碍。即使经过多年抗病毒治疗,体内仍有一群细胞携带可复制的HIV-1病毒,这就是所谓的“病毒储存库”[1]。HIV-1 DNA是病毒复制过程中的重要中间产物,根据其存在形式主要分为整合型和未整合型(线性或/和环状)两大类[2]。这两种形式的HIV-1 DNA组成总HIV-1 DNA,并参与HIV发病机制。国内外研究表明,总HIV-1 DNA不仅是感染早期(窗口期)的关键标志物,其载量水平与病毒储存库含量、疾病进展及cART疗效密切相关。尤其是,线性与环状HIV-1 DNA间的相互转换是病毒储存库动态维持的核心机制之一[3]。
三、总HIV-1 DNA检测的方法
总HIV-1 DNA检测方法以实时荧光定量PCR法、数字PCR法、焦磷酸化激活聚合酶法和CRISPER-Cas12a联合金纳米颗粒双扩增法等为主。临床上应用较为广泛的是实时荧光定量PCR法(qPCR法)和数字PCR法(ddPCR法),可以准确、精确地定量总HIV-1 DNA[3]。qPCR法是检测总HIV-1DNA的核心技术之一,ddPCR是一种核酸检测和绝对定量的新方法。与qPCR相比,ddPCR增加了分液操作,将配好的PCR反应体系分隔成众多微小的、独立的反应体系,模板DNA分子随机进入到各体系中,通过产物的荧光定量实现样品的绝对定量[1]。两种方法获得的检测结果非常接近,如果ddPCR应用于诊断需特别注意可能产生的假阳性[4]。
四、HIV-1 DNA检测的临床应用
HIV-1 DNA可用于HIV感染的早期诊断和HIV抗体检测不确定结果的辅助诊断;也可以判定HIV-1储存库含量,监测抗病毒治疗效果,可更准确预测HIV-1传播风险和病情进展[1]。
五、HIV-1 DNA检测的局限性
在某些特殊情况下,可能导致HIV-1 DNA检测的非实验室污染相关的假阳性结果。同时,多种因素可能导致HIV-1 DNA检测出现假阴性,可能原因包括检测方法灵敏度不足、采样不当、样本保存不当等[3]。
(四川省疾控中心 杨洪)
来源:中国疾控艾防中心
编辑:张风萍 初审:刘艳君
终审:丁 宁